一 、开机：
1 、打开电脑；
2、打开液相色谱各个模块的电源；
3 、双击桌面“LC1260(Online)” ，进入联机界面；
二 、排气：
1、手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）
2 、右键单击“Pump ”图标区域 ，选择“Method ”选项，进入泵编辑画面 ，设流速：5ml/min ，点击“确定”；
3 、右键单击“Pump ” 图标区域，点击“Control ”选项 ，选中“ON” ，点击“确定 ”，则系统开始冲洗 ，直到
管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟） ，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道
无气泡为止；
4、右键单击“Pump ” 图标，点击“Method”选项 ，设流速：0ml/min ，手动旋紧冲洗阀；
5 、右键单击“Pump ”图标，点击“Method ”选项 ，按照方法要求选择合适比例的流动相 ，设流速：1.0ml/min；（不一定是1）；
6 、同理右键单击“Column Comp”，“DAD”图标 ，点击“Method ”选项 ，按照；
7、方法的要求设置温度，波长 ，点击“控制 ” 选项 ，“ON”打开柱温箱和检测器；
三、编辑方法：
1 、点击“Method ”—— “Edit EntireMethod ”开始编辑完整方法；
2 、选中除“Data Analysis ”外的三项，进入下一选项卡 ，选择“Als ”（自动进样） ，点击“OK ”，进入下一选项；
3、选择“Method”菜单下“Method Information ”选项，在“Method Comments ”中加入方法的信息（如：
This is for test!） ，选择“OK” ，进入下一选项；
4 、泵参数设定：右键单击“Pump ”图标，点击“Method? ”选项 ，设置“Flow”：如1.0ml/min；“Stop?
Time”：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间） ，按照要求选择合适比例的流动相配
比，选择“OK ” ，进入下一选项；
5 、自动进样器参数设定：右键单击“Sampler ”图标 ，点击“Method”选项，选择“Injection volume ” ，输
入进样体积 ，选择“OK ”，进入下一选项；
6、柱温箱参数设定：右键单击“Column Comp” ，点击“Method ”选项 ，设置“Left ”温度（可设置温度范
围：低于室温10℃-80℃），一般“Left”和“Right ”温度一致，选择“Combined ”绑定即可 ，“Stop?
Time”选择“As Pump /Injector ” ，选择“OK ”，进入下一选项；
7 、UV检测器参数设定: 右击“DAD” ，点击“Method?”选项 ，下方的空白处输入所需的检测波长（可
根据需要选择多个波长，最多可选8个波长）；“Stop Time ”选择“As Pump /Injector ”；“Spectrum”?
——“Store ”选项下 ，根据需要选择 “None ”或“All（全波长扫描）”等选项 ，选择“OK ”，进入下一选
项；
8 、编辑方法完毕 ，从“Method ”菜单中 ，选中“Save Method As”，输入一方法名 ，选择“OK ” ，保存方
法成功 。
9、单针进样
10 、从“Run Control ”菜单中，选择“Sample Information”选项，输入“Operator Name ”；在“Data File ”中
选择“Path”和 “Prefix/Counter（文件命名）”设置“Prefix（一般设置为年月日） ”和“Counter ”；输
入“Location（样品位置）”和“Sample Name ” ，选择“OK ” ，进入下一选项；
11 、基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Method ”选项，开始进样 。
四、序列进样：
1 、选择“Sequence ”菜单下“ Sequence Table”选项 ，在“Confiqure Table ”中选择需要选项 ，一般
为“Vial(样品瓶) ”，“Sample Name(样品名称)” ，“Method Name(方法名称) ” ，“Inj/Vial（进样次
数） ”，“Sample Type（样品类型）” ，“Datafile（文件名）”和“Inj Volume（进样体积） ”；
2 、点击“Inset ”生成一行 ，设置上述参数，选中该行 ，点击“Copy”和“Paste ”复制后修改相应参数 ，即
生成序列表，选择“OK ”，进入下一选项；
3、点击“Sequence”菜单下“ Sequence Parameters ”选项 ，选择序列数据的“Path ”（序列会自动生成
以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据） ，数据建议选择 “Prefix/Counter ”保存；
在“Shutdown ”选项下选中“Post-Sequence Command/Macro”，根据需要选择“PUMPALL OFF（序列
结束后关闭泵） ” ” “LAMPALL OFF（序列结束后关闭紫外灯）”” “STANDBY（序列结束后关闭紫外灯
和泵） ” ，选择“OK ” ，进入下一选项；（注：若“Path”中默认保存于C盘，则可点击“View ” ，选
择“Preferences ” ，根据需要添加相应的“SequenceTemplates”“Data ”“Master Methods ”保存路径）
4、从“Sequence”菜单，选中“Save Sequence Template As ” ，输入一序列名 ，选择“OK ”，即可；
5 、基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Sequence ”选项 ，开始序列进样。
（注：若中途停止运行 ，则选择“Run Control ”中的“Stop Run/Inject/ Sequence”可保留图谱信息，若选
择Abort，则所有图谱信息都丢失）
五 、数据分析（脱机状态使用）：
1、双击“LC1260（Offline）”图标进入的脱机画面
2 、从“View ”菜单中 ，点击“Data Analysis ”进入数据分析画面
3 、从“File”菜单选择“Load Signal ” ，选中所需的数据文件名，点击“OK ” ，则数据被调出 。
4、谱图优化：从“Graphics”菜单中选择“Signal Options ” 。从“范围 ” 中选择“Full”或“Use Ranges ” 选择
所需“Time Range ”和“Response Range” ，选择“OK ”；从“Integration ”中选择“Integration Events”，调
整“Area Reject”和“Height Reject ”删除杂峰；点击“Set Integration ”图标 ，可选择性消除不需要的积
分 ，若想消除该操作，则选择“Method Manual Events”上排左起第5个图标进行移除操作即可 ，点击
左边“√ ”图标 ，将积分参数存入方法并退出“Integration Events ”。
（注：“Set Integration”图标为）
六 、标准曲线绘制：
1 、选择“Calibration ”菜单下“New Calibration Table ”，选择“Automatic Setup”中“Level（即标曲中对应
的点 ，第一个点即为1） ”和“Defanlt Amount（标准品对应点的浓度） ” ，选择“OK”；
2、通过选择“Calibration ”菜单下的“Add Level ”选项依次添加各点参数，若为外标法，在“ISTD”项下
选“NO” ，若为内标法则选“Yes ”；“# ”项下对应标准品和内标无的数字的应统一；若想更改标准曲线中
的对应点；
3 、选择“Calibration”菜单下的“Recalibrate ”项的“Mode ”选项 ，选择“Average”则表示取当前点与标曲
中对应点的平均值替代标曲中原对应点，若选择“Replace ”则表示将当前点取代标曲中对应点；
（注：修改“Defanlt Amount ”中浓度单位的方法：选择“Calibration”项下“Calibration Setting ” ，修
改“Amount Units ” ，设置浓度单位；选择“Calibration”项下“Calibration Setting ”，修改“Default?
CalibrationCurve ” ，选择合适的曲线类型-Type ，是否过原点-Origin和各点对于标准曲线的比重-
Weight，通常选Equal）
4 、调出样品谱图 ，点击需要计算浓度的色谱峰 ，选择“Report” 菜单中的“Specify Report”，选
择“Report style ”为“Detail ” ，点击“OK”后选择“打印预览 ”图标 ，在报告中即可体现计算结果 。
七、 图谱重叠设置：
1 、选择“File ”菜单下“Overlay Signal”选项，选择任意需要重叠的图谱；
2 、在“Signal ”选项下，选择“3D Signal Overlay ”图标（紧邻图谱上方左起第四个图标） ，在弹出
的“Adjust Signal OverlayOptions”对话框中调节交错时间和高度；若想移除重叠谱图 ，点击第六个图
标 。
八、信噪比等参数计算：
1、选择“Report ”菜单中的“System Suitability ”项下的“Edit Noise Range”选项，设置时间范围（超过
1min）；
2 、选择“Report ” 菜单中的“Specify Report ” ，选择“Report style”为“Perfomance+Noise” ，点
击“OK ”后，即可预览信噪比参数；
3 、选择“Report ” 菜单中的“Specify Report” ，选择“Report style ”为“Extended Perfomance ” ，点
击“OK”后，即可预览对称性、拖尾因子等所有参数。
九 、程序运行时检测出峰情况：
选择“File ”菜单下的“Snapshot ”选项即可 。
十 、打印报告：
1、从“Report”菜单中选择“Report Mode ” ，选择“Use Classic Reporting ”；
2 、从“Report”菜单中选择“打印报告 ” ，则报告结果将被打印 。
十一 、关机：
1、冲洗色谱柱和系统后，退出化学工作站及其它窗口 ，关闭计算机；
2 、关闭Agilent 1260各模块电源开关。
扩展资料
定义：液相色谱是一类分离与分析技术 ，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如
纸 、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中．为了区分各种方法 ，根据固定相的形式产生
了各自的命名 ，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱 。
基本原理：使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱 ，通过压力在固定相中移动 ，由
于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱 ，通过检测器得到
不同的峰信号 ，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质 。高效液相色谱作为一
种重要的分析方法，广泛地应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色
谱没有本质的差别 ，它的特点是采用了高压输液泵 、高灵敏度检测器和高效微粒固定相 ，适于
分析高沸点不易挥发 、分子量大、不同极性的有机化合物 。
高效液相色谱系统主要由流动相储液瓶、输液泵 、进样器 、色谱柱、检测器和记录仪组成，其整体
组成类似于气相色谱 ，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整 。高效液相色谱的输液泵要求
输液量恒定平稳 ，进样系统要求进样便利 、切换严密。同时，由于液体流动相黏度远远高于气体，
为了减低柱压 ，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗 ，长度也远小于气相色谱柱 。
参考资料：
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